Tá seichimh ghéanómacha fhormhór na víreas ar eolas.Taiscéalaithe aigéid núicléigh arb éard iad teascáin ghearra DNA atá deartha chun hibridiú a dhéanamh le teascáin víreasacha comhlántacha DNA nó RNA .Is teicníc níos éifeachtaí é imoibriú slabhra polaiméaráise (PCR) chun víreas a bhrath.Forbraíodh modhanna diagnóiseacha tréchur ard le déanaí.
A. Teicníc hibridithe aigéid núicléasaigh
Teicníc nua atá ag forbairt go tapa i réimse diagnóiseacha víris is ea hibridiú aigéid núicléigh, lena n-áirítear blotting an Deiscirt (an Deiscirt) agus blotting Thuaisceart (Tuaisceart go príomha).Is é an réasúnaíocht atá leis an measúnacht hibridithe ná úsáid a bhaint as teascáin ghearra de DNA (ar a dtugtar “probe”) atá deartha chun hibridiú a dhéanamh le codanna víreasacha comhlántacha DNA nó RNA.Trí chóireáil teasa nó alcaileach, déantar sprioc DNA nó RNA dúbailte-snáithe a dheighilt ina snáitheanna singil agus ansin díluailítear iad ar thaca soladach.Ina dhiaidh sin, cuirtear an taiscéalaí leis agus hibridítear é leis an sprioc-DNA nó RNA.Toisc go bhfuil an tóireadóir lipéadaithe le iseatóp nó le núiclídí neamh-radaighníomhach, is féidir an DNA sprice nó RNA a bhrath trí uathradagrafaíocht nó tríd an gcóras biotin-aicidín .Ós rud é go bhfuil an chuid is mó de ghéanóim víreasacha clónáilte agus in ord, is féidir iad a bhrath trí úsáid a bhaint as seichimh a bhaineann go sonrach le víreas mar thaiscéalaithe san eiseamal.Faoi láthair, áirítear leis na modhanna hibridithe: blot ponc , hibridiú in situ i gcealla , blotting DNA (DNA) (blotting Deiscirt) agus RNA blotting (RNA) (blot Thuaisceart).
Teicneolaíocht B.PCR
Le blianta beaga anuas, forbraíodh sraith de theicnící aimplithe aigéid núicléacha in vitro bunaithe ar PCR, chun víris neamh-íogair nó neamhshaothraithe a thástáil.Is modh é PCR ar féidir seicheamh sonrach DNA a shintéisiú trí imoibriú polaiméireáis in vitro.Cuimsíonn próiseas PCR timthriall teirmeach de thrí chéim: dínádúrú, annealing, agus síneadh Ag teocht ard (93 ℃ ~ 95 ℃), tá an DNA dúbailte-snáithe deighilte ina dhá shraith DNA aonair;ansin ag teocht íseal (37 ℃ ~ 60 ℃), dhá primers nucleotide sintéiseithe anneal leis na codanna DNA comhlántach;ach ag an teocht chuí don einsím Taq (72 ℃), tosaíonn sintéis slabhraí DNA nua ó primer 3'end ag baint úsáide as DNA comhlántach mar theimpléid agus núicléatídí aonair mar ábhair.Mar sin tar éis gach timthriall, is féidir slabhra DNA amháin a mhéadú ina dhá shlabhra.Agus an próiseas seo á dhéanamh arís, is féidir gach slabhra DNA a shintéisiú i dtimthriall amháin a úsáid mar theimpléad sa chéad timthriall eile, agus déantar líon na slabhraí DNA a dhúbailt i ngach timthriall, rud a chiallaíonn go bhfuil táirgeadh PCR méadaithe i luas log 2n.Tar éis 25 go 30 timthriallta, sainaithnítear táirgeadh PCR trí leictreafóiréis, agus is féidir na táirgí DNA sonracha a fheiceáil faoi sholas UV (254nm).Chun a bhuntáiste a bhaineann le sainiúlacht, íogaireacht, agus áisiúlacht, tá PCR glactha i ndiagnóis chliniciúil ar go leor ionfhabhtuithe víreasacha mar HCV, VEID, CMV, agus HPV.Toisc go bhfuil PCR an-íogair, is féidir leis DNA víreas a bhrath ag leibhéal fg, ba chóir an oibríocht a dhéanamh go han-chúramach chun dearfach bréagach a sheachaint.Ina theannta sin, ní chiallaíonn toradh dearfach ar thástáil aigéid núicléigh go bhfuil víreas ionfhabhtaíoch beo sa sampla.
Le cur i bhfeidhm leathan ar theicníc PCR, forbraítear teicnící agus modhanna nua bunaithe ar theicníc PCR chun críocha tástála éagsúla.Mar shampla, is féidir leis an PCR cainníochtúil fíor-ama ualach víreasach a bhrath;úsáidtear PCR in situ chun ionfhabhtú víreas a aithint i bhfíocháin nó i gcealla;Is féidir leis an PCR neadaithe sainiúlacht PCR a mhéadú.Ina measc, forbraíodh PCR cainníochtúil fíor-ama níos tapúla.Tá go leor teicnící nua, ar nós taiscéalaí hidrealú TaqMan, taiscéalaí hibridithe, agus taiscéalaí rabhcháin mhóilíneach, comhcheangailte i dteicníc chainníochtúil PCR fíor-ama, a úsáidtear go forleathan i dtaighde cliniciúil.Seachas an t-ualach víreasach i sreabhán coirp na n-othar a aithint go cruinn, is féidir an modh seo a úsáid freisin chun mutants atá fulangach le drugaí a bhrath.Dá bhrí sin, cuirtear PCR cainníochtúil fíor-ama i bhfeidhm go príomha i meastóireacht éifeacht leigheasach agus faireachas caoinfhulaingt drugaí.
C. Brath ard-thréchur aigéid núicléacha víreasacha
Chun freastal ar na riachtanais maidir le diagnóis tapa a dhéanamh ar ghalair thógálacha nua atá ag teacht chun cinn, tá modhanna braite ard-thréchuir éagsúla bunaithe, amhail sliseanna DNA (DNA).Maidir le sceallóga DNA, déantar tóireadóirí sonracha a shintéisiú agus a cheangal le sceallóga beaga sileacain ar dhlús an-ard chun micrea-eagar taiscéalaithe DNA (DNA) a fhoirmiú ar féidir hibridiú a dhéanamh orthu le sampla.Is féidir comhartha an hibridithe a íomháú le micreascóp comhfhócasach nó le scanóir léasair agus é a phróiseáil tuilleadh ag an ríomhaire agus is féidir tacar ollmhór sonraí a fháil maidir le géinte éagsúla.Tá dhá chineál sliseanna DNA ann.Seo a leanas an “sliseanna sintéise”: déantar na oligonucleotides sonracha a shintéisiú go díreach ar na sliseanna.Eile is ea sliseanna linn DNA.Tá na géinte clónáilte nó na táirgí PCR clóite go hordúil ar an sleamhnán.Is é an buntáiste a bhaineann le teicneolaíocht sliseanna DNA ná cainníocht ollmhór de sheichimh DNA a bhrath go comhuaineach.Is féidir leis an leagan is déanaí de shlis braite pataigin níos mó ná 1700 víreas daonna a aithint láithreach.Réitigh teicneolaíocht sliseanna DNA na fadhbanna a bhaineann le modhanna hibridithe aigéad núicléacha traidisiúnta agus tá feidhmchláir an-leathan aige i ndiagnóis víreasach agus i staidéar eipidéimeolaíochta.
Am postála: Nollaig-23-2020